液相色谱-MS分析时的基质效应客观存在,并随生物样品的不同而不同。影响基质效应的因素很多,如样品、样品基质、样品前处理过程、色谱条件、色谱分离效果、流动相和离子化等,故基质效应的消除或降低,***先要有合适的样品前处理方法,其次要有分离良好的液相条件。
1 样品前处理
改进前处理方法、纯化样品、尽可能地减少***终提取液中的基质成分是***有效、彻底地消除基质效应的方法。生物样品的前处理方法很多,研究普遍认为利用有机溶剂蛋白质沉淀法或稀释法处理的样品,其基质效应明显***于SPE或LLE方法。尽管样品前处理过程繁琐,但样品纯化仍是***优的基质效应消除方法。
2 同位素内标
同位素内标不但可抵消质谱离子化时的基质效应,还可消除样品前处理过程中的差异。 但同位素内标购置困难,且在多个分析物同时检测时,由于存在极性差异,即使是同类物的同位素内标也很难抵消基质效应,造成定量结果偏差。
3 色谱分离
合适的色谱分离也可降低基质效应。采用柱后注射法确定基质效应的出现时间,即可调整色谱条件,使分析物避免在此段时间内出峰。此方法在***通量分析时无法使用,但可用快速梯度的方法将分析物与溶剂分离。
4 质谱分析
基质效应随离子源、离子化模式和仪器的不同而不同。修正质谱分析是一种比较易行的方法,无需改变样品的前处理和色谱条件。虽然APCI同样存在基质效应,但是对于特定的化合物,特别是对于蛋白质沉淀法处理的样品,若采用ESI有明显的基质效应,但可能该基质并不影响APCI的离子化。另外,APPI因其离子化机制不同于APCI和ESI,也不会产生相似的基质效应。 LC-MS/MS分析时应采用相同基质的标准物质添加以校正,以使结果更准确。Mei等经考察后认为应尽可能使用同一牌子的塑料管,避免使用肝素锂管抗凝,以减少基质效应影响。
